发布时间：2026-02-09
胞内细胞因子的检测是定义T细胞类型以及评估细胞功能的重要实验之一，细胞因子的检测除了需要刺激剂（PMA/ionomycin、concanavalin A,lipopolysaccharide或特异性的抗原）还需要加入蛋白转运抑制剂，阻止蛋白分泌出来，以使细胞因子在细胞内聚集，从而实现更好的细胞因子检测效果。
图1.胞内细胞因子的检测需加入蛋白转运抑制剂
图2.蛋白转运抑制剂可使细胞因子聚集，从而提高细胞细胞因子的检出率
有同学发现不同蛋白转运抑制剂对细胞因子的检测结果有非常大的影响，那市面上的转运抑制剂有哪些？它们的成分有什么不同？哪种效果好？今天我们就来揭秘不同蛋白转运抑制剂之间的差异。
市面上常用的蛋白转运抑制剂有两种，一种是莫能菌素（Monensin），BD商品名为GolgiStop（货号554724）；另一种是布雷非德菌素A（Brefeldin A）BD商品名为GolgiPlug（555029）。虽然两种蛋白转运抑制剂都是作用于高尔基复合物，但已经有研究发现这两种蛋白转运抑制剂对于不同刺激方式、不同的刺激时间、不同的细胞因子有不同的抑制效果，为此我们做了两个验证实验。
实验一：评估不同蛋白转运抑制剂对IL-2和TNF两种细胞因子产生的影响。小鼠的脾脏细胞用anti-CD3（25 ug/ml）+soluble anti-CD28（2 ug/ml）刺激4小时，在这个过程中分别分别平行加入BD GolgiPlug or BD GolgiStop，来比较不同的蛋白转运抑制剂对IL-2和TNF产生的影响，结果如下图：
图3.不同蛋白转运抑制剂对T细胞活化过程中细胞因子累积的影响
在这个实验中，我们发现BD GolgiPlug和BD GolgiStop对积累细胞因子IL-2和TNF的效果没有差异，两种细胞因子的检测结果是一样的。
实验二：PMA/ionomycin体外刺激CD4+T细胞的再活化是免疫学研究最常用的实验之一，我们也对在PMA/ionomycin刺激下，不同转运抑制剂对各种细胞因子累积检测的影响做了评估。
在活化的CD4+ T细胞中加入PMA（10ng/mL）和ionomycin（250 ng/mL）刺激5小时，分别加入BD GolgiPlug或者BD GolgiStop，刺激完后做细胞染色，流式检测IL-4、IL-10、TNF、IFN-γ等细胞因子的累积情况，实验结果如下图：
图4.不同转运抑制剂对PMA/Inomycin刺激后细胞因子产生的影响
在此实验中，BD GolgiPlug 对TNF积累有更好的效果，然而BD GolgiStop对于IL-4和IL-10的积累是更高效的。
总结：
通过以上两个实验我们可以看到两种蛋白转运抑制剂在不同刺激条件下，对细胞因子的累积能力是不一样的，如同样是TNF的检测，在anti-CD3和anti-CD28的刺激条件下，两种蛋白转运抑制剂对TNF的积累没有差异；但在PMA/Inomycin刺激下，BD GolgiPlug的效果明显优于GolgiStop。在同一刺激条件下，不同细胞因子对两种抑制剂的偏好也不一样。此外两种蛋白转运抑制剂的不同，效果也可能不同。因此在实验系统建立之初，就应当关注并测试两种蛋白转运抑制剂的不同，以达到对所检测细胞因子的最优处理效果。
关注培镨生物，了解更多相关知识