发布时间：2026-04-07
一、类器官技术
类器官（Organoid）是依托体外三维培养技术，由成体干细胞、多能干细胞或组织祖细胞定向诱导分化形成的 “微型器官”，具备目标器官的典型空间结构、多种细胞类型及部分生理功能，且遗传特征稳定、可长期传代培养。类器官在疾病建模、药物筛选、再生医学及发育生物学研究中展现出不可替代的价值，有效弥补了二维模型缺乏空间结构、动物模型物种差异大等局限。
然而，类器官的三维立体结构导致传统切片成像技术无法完整捕捉其内部细胞排布、细胞间相互作用及组织微环境特征，且会造成结构破坏与信息丢失。为了深度研究类器官的研究，可以选择使用透明化技术 —— 通过降低组织内部折射率差异、减少光散射，使不透明的类器官样本实现光学透明，搭配免疫荧光标记与共聚焦显微镜，可在保持样本结构完整性的前提下，实现从表层到深层的高分辨率 3D 成像，精准解析其三维 cytoarchitecture（细胞架构）与分子表达特征。
二、Sunjin RapiClear 透明试剂的特性与优势
组织透明化技术需通过 “脱脂 / 脱色 + 折射率匹配” 实现透明效果，传统试剂分为亲水性与疏水性两类：疏水性试剂（如 BABB）虽透明速度快，但毒性强、易导致组织收缩且破坏荧光信号；部分亲水性试剂（如 CLARITY 相关方案）需依赖电泳设备、操作复杂且耗时较长。
Sunjin RapiClear 作为一款优化的水性透明试剂，凭借其独特设计解决了传统技术的痛点，核心优势如下：
1. 温和保结构与信号：采用水性配方，无毒性且不会引起组织收缩或膨大，能完整保留类器官的三维结构及蛋白质、荧光基团活性，兼容免疫荧光标记后的信号稳定，避免荧光淬灭；
1. 高效折射率匹配：折射率（RI）精准调控至 1.45-1.49，与生物组织折射率高度匹配，可显著降低光散射，实现数毫米深度的清晰成像，搭配硅基或水浸物镜即可获得高分辨率 3D 图像；
1. 操作便捷且灵活：无需特殊设备，直接浸泡即可实现透明化，流程简单易上手；试剂可反复使用数次，降低实验成本；同时兼容多种类器官类型（如肠道、肝脏、脑类器官等），适配不同研究场景；
1. 无缝衔接成像流程：透明试剂自带抗淬灭封片功能，无需额外添加封片剂，透明后的样本可直接转移至载玻片封片成像，简化实验步骤并减少样本损伤。
三、类器官透明化完整实验流程（基于 Sunjin RapiClear）
1. 固定：用 4% 新鲜多聚甲醛（PFA）处理类器官，置于 4℃摇床温和孵育 4-6 小时，确保样本结构稳定固定；
2. 洗涤：室温下用 PBS 缓冲液洗涤 3 次，每次 30 分钟（摇床振荡），彻底去除残留固定液；
3. 通透：将样本转移至含 2% PBST（含 2% Triton X-100 与 0.05% 叠氮化钠的 PBS 溶液）的 5mL 离心管中，室温摇床孵育 2 天，增强抗体渗透效率；
4. 洗涤：再次用 PBS 室温摇床洗涤 3 次，每次 30 分钟，去除多余通透试剂；
5. 免疫荧光检测：
1）封闭（Blocking）：加入适量封闭液，室温孵育 2 天，减少非特异性结合；
2）一抗孵育：一抗按 1:200 比例稀释（可根据抗体厂家要求调整浓度），将样本置于 2mL 管中，15℃摇床孵育 4 天，确保抗体充分结合靶标；
3）二抗孵育：二抗按 1:200 比例稀释（适配一抗种属与荧光标记），同样在 2mL 管中 15℃摇床孵育 3 天，避免荧光基团损伤。
6. 透明处理：将完成免疫荧光标记的样本转移至含 Sunjin RapiClear 试剂的 2mL 管中，浸泡至样本完全透明（试剂可反复使用数次，需避免污染）；
7. 封片：将透明后的样本小心转移至载玻片上，利用 RapiClear 自带的抗淬灭特性，直接添加适量试剂封片，避免气泡产生；
8. 共聚焦成像：选用适配的浸没物镜进行 3D 成像，推荐机型及物镜包括：Zeiss 25x/0.8 multiple immersion (WD 0.57mm)、Leica 20x/0.75 multiple immersion (WD 0.68mm)、Nikon 25x/1.05 silicone immersion (WD 0.55mm)、Nikon 20x/0.95 water immersion (WD 0.95mm)、Olympus 30x/1.05 silicone immersion (WD 0.8mm)，均可获得高清晰度的三维结构图像。
透明效果：
