类器官（Organoid）的组织透明化方案

发布时间：2024-09-18

1.用4%新鲜多聚甲醛固定类器官，置于4℃摇床4-6小时。

2.用PBS室温下洗涤3次，置于摇床，每次30min。

3.样品加入2%PBST（2% Triton X-100的PBS含0.05%叠氮化钠）的5mL管中，置于摇床室温孵育2天

4.用PBS室温下洗涤3次，置于摇床，每次30min。

5.免疫荧光检测简易步骤

--封闭液封闭（Blocking），2天；

--一抗，根据说明书稀释，孵育4天；

--二抗，根据说明书稀释，孵育3天；

注：免疫荧光操作过程中，可将样品置于2mL管中，15℃摇床孵育一抗和二抗。

6.样品转移至含RapiClear的离心管中，RapiClear可反复使用数次。

7.将透明的杨波转移至载玻片，透明试剂中含抗淬灭封片剂，加RapiClear封片即可。

8.共聚焦成像。

直径1.2mm之类器官（Organoid）使用RC149进行透明化

Organoid神经元表达GFP荧光蛋白的景深影像。

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