调节性T细胞疗法开发

发布时间：2024-09-25

调节性T细胞（Regulatory T Cells, Tregs）是一类专职抑制免疫活性、维持机体免疫平衡的免疫细胞。虽然含量较低而且将Treg作为单独一类T细胞

开展研究直到90年代才开始，但Treg在免疫调节中的重要性不容忽视。除针对Treg开展的基础研究，基于Treg的细胞治疗方案应用于过度免疫激活

引发的组织损伤、自身免疫疾病也正成为免疫细胞治疗的热点分支。

Treg含量低，只占外周血CD4+ T细胞总数量的5%；
Treg细胞可通过调节表面细胞因子受体和转录因子表达和改变分泌细胞因子类型等机理，特化为一型辅助样T细胞 (TH1 cell-like), 二型辅助样T细胞

 (TH2 cell-like)和产生IL-17的辅助样T细胞（IL-17-producing helper T cell），分别对TH1, TH2和TH17细胞群体发挥抑制功能.甚至有研究认为，只

有表型接近于这三大类辅助T细胞的，才能被Treg所抑制；

Treg具有显著的表型不稳定性，在极剧的炎性环境中可丢失FOXP3表达并失去免疫抑制功能，转变为效应性T（Teff）细胞；

Treg细胞的免疫抑制功能主要依靠旁路抑制和感染耐受实现。所谓旁路抑制，就是特异识别某一抗原的Treg细胞将抑制所有其他抗原特异性T细胞；

感染耐受指某一群细胞所具有的免疫抑制性可以传递给另一群细胞，这主要是依靠Treg细胞分泌抑制性细胞因子作用于DC，抑制DC的成熟和迁移

并制造了一个导致耐受的局部环境，在这个环境中Teff细胞将大量凋亡，naïve T细胞转变为诱导型Treg（iTreg）细胞。

截至2019年7月，全球注册的基于Treg的细胞治疗项目共51项，充分展示了Treg被广泛看好用于自身免疫疾病、自身炎症反应和移植工程抵抗排斥的

前景；但其高失败比率（5项提前终止，4项停滞、2项撤回）也充分提示，Treg的研究特别是细胞制备工艺充满诸多挑战亟待攻克，这都是由Treg的

自身特性决定的：
多重标记物
Treg细胞最严格的鉴定标记物是核内转录因子FOXP3：FOXP3基因不表达直接导致Treg细胞丧失免疫抑制功能，该基因出现突变可导致严重的自身免

疫疾病，最为人知的就是免疫失调性多内分泌腺病性肠病x连锁综合征，所以当前转化研究和临床实验采用最多的Treg鉴定标准为CD4+FOXP3+细胞。
其他与Treg功能相关的细胞表面标记物如常用的CD25。CD25亦被称为IL-2受体α亚基，高表达CD25但自身不分泌IL-2也是Treg细胞的重要特征，这也

部分解释了在极度促炎性的环境中由于缺乏周围细胞分泌的IL-2刺激，Treg细胞将转变为Teff细胞的原因。CD127(又称IL-17受体α亚基)与T细胞的增殖

和活化关系密切，更重要的是，CD127的表达与FOXP3、Treg的免疫抑制性功能存在负向关联，因此CD4+CD25+CD127low/-常被用于Treg细胞分选的

标记物组合。
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长类）的不同应用需求。

产品货号	产品名称	起始样品	最适应用说明
130-091-301	CD4+CD25+ Regulatory T Cell Isolation Kit, human	Human PBMC	最常用、普适regulatory T cell分离产品
130-093-631	CD4+CD25+CD45RA+ Regulatory T Cell Isolation Kit, human	Human PBMC	用于分离Naive regulatory T cells，这部分细胞免疫抑制功能和体外扩增能力均较强，适合于体外抑制实验。
130-094-775	CD4+CD25+CD127dim/- Regulatory T Cell Isolation Kit II, human	Human PBMC	对于功能性调节T细胞的分选
130-094-551	CD25+CD49d– Regulatory T Cell Isolation Kit, human	Human PBMC	CD49d常表达于效应T细胞，充分去除CD49d有助于去除CD25+的效应T细胞，得到高纯度调节性T细胞。
130-091-041	CD4+CD25+ Regulatory T Cell Isolation Kit, mouse	小鼠脾脏和淋巴结单细胞悬液
130-092-984	CD4+CD25+ Regulatory T Cell Isolation Kit, non-human primate	恒河猴PBMC	可用于食蟹猴交叉作用

扩增困难
与效应T（Teff）细胞类群比较，Treg的增殖能力较差，扩增速度较慢。当分离Treg细胞后需要体外扩增时就需格外注意细胞分选的纯度，

因为随着体外培养时间的延长，培养物中混入的Teff细胞将过度增殖导致最终完全湮没Treg细胞。

Treg不同亚型的扩增能力不同，CD45RA+ Naïve Treg细胞处于静息状态，给予刺激后迅速进入扩增阶段并能较好维持Treg细胞的谱系；相比之下CD45RA

-CCR7+亚群是扩增能力最差的Treg.

多种组织、样本可作为获取人Treg细胞的来源，包括外周血、脐带血和小儿先天性心脏病外科手术时为便捷术中操作而摘除的胸腺。
外周血虽然是最方便易得的Treg来源，但其中的Treg含量较低给分离富集造成困难，但优点在于外周血来源Treg扩增能力较强；
小儿胸腺组织内有大量的Treg细胞，约300ⅹ10^6个CD4+CD25+细胞，这相当于一个成年人全部外周血内所有的Treg数量。尽管小儿胸腺来源Treg多为

CD45RA+，但体外扩增能力较弱。
表型不稳定性
Treg细胞具有基因和功能不稳定的特性，特别是在剧烈的炎性环境中易出现FOXP3表达缺失、丧失免疫抑制功能并转变为功能性T细胞(Teff)，进而加剧炎性

反应和自身免疫反应。多种增强Treg稳定性的方法已有文献报道，过表达FOXP3, HELIOS或BACH2等核基因，甚至保持STAT5持续激活等方法均为有效。

Treg研究和应用是一个非常宽泛的话题，很多技术细节有待深度探讨。后续我们还会详述抗原特异性Treg细胞的重要性、扩增要点及功能验证方法，看Treg是

如何应用于移植工程对抗排斥。另外, 组织固有Treg细胞也是重要的Treg来源，因被发现具有免疫平衡以外的功能，越来越引起研究者的兴趣。Treg细胞研究将

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